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Tipo de Mídia:
Texto
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Formato:
.pdf
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Tamanho:
9,19
MB
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Título: |
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Aspectos estruturais, dinâmicos e termodinâmicos envolvidos na montagem in vitro do capsídeo do Vírus da Hepatite C e na inibição da Proteína Inibidora de Apoptose XIAP, revelados por análises [...] |
Autor: |
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Theo Luiz Ferraz de Souza
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Categoria: |
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Teses e Dissertações |
Idioma: |
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Português |
Instituição:/Parceiro |
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[cp] Programas de Pós-graduação da CAPES
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Instituição:/Programa |
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UFRJ/QUÍMICA BIOLÓGICA |
Área Conhecimento |
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BIOQUÍMICA |
Nível |
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Doutorado
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Ano da Tese |
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2010 |
Acessos: |
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205 |
Resumo |
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A Hepatite C é um problema de saúde pública mundial. Aproximadamente 3% da
população mundial encontra-se atualmente infectada pelo Vírus da Hepatite C (HCV). A região
N-terminal da proteína capsídica do Vírus da Hepatite C (HCV124) tem sido descrita como uma
proteína intrinsecamente desestruturada. Além de sua função estrutural, esta proteína é
responsável por vários processos virais e celulares, desempenhando um papel crítico na
patogênese da hepatite C, porém tais mecanismos não são bem compreendidos. Este trabalho
visa uma melhor compreensão da montagem do HCV in vitro e da relação estrutura-função da
HCV124. Aqui, nós utilizamos espectrofotometria, espectroscopia de fluorescência, dicroísmo
circular, microscopia eletrônica e calorimetria para investigar a relação estrutura-função desta
proteína em uma forma truncada com 124 aminoácidos (HCV124), e assim acrescentar alguns
aspectos termodinâmicos. Mostramos que esta proteína monomérica truncada pode adotar
estruturas intermediárias em diferentes condições, tais como na presença da sonda bis-8-
anilinonaftaleno-1-sulfonato (bis-ANS), trifluoretanol (TFE), dodecil sulfato de sódio (SDS) ou
alta concentração de sal. Estes ligantes e condições físicas podem mimetizar ambientes
fisiológicos em que a proteína capsídica do HCV é capaz de se ligar a diferentes alvos e
desempenhar diferentes funções. Por outro lado, quando submetemos a proteína capsídica do
HCV a pH próximo do ponto isoelétrico, verificamos a formação de partículas semelhantes ao
nucleocapsídeo (NLPs) por microscopia eletrônica. Esse resultado mostra claramente, pela
primeira vez, que a neutralização de resíduos básicos é o principal fator que impulsiona o
processo de multimerização da proteína em solução. Mostramos também que a montagem de
NLPs desencadeada por sequências de DNA ou RNA curtas é inespecífica e entalpicamente
dirigida, como verificado por calorimetria de titulação isotérmica. A HCV124 fusionada à
Proteína Fluorescente Verde (GFP) também foi utilizada e todos os resultados foram
semelhantes, indicando que a GFP não inibe o processo e que esta forma fusionada pode ser
utilizada em ensaios em células. Ensaios de gel shift e dados de polarização de fluorescência e
espectroscopia de correlação de fluorescência indicam que a montagem é altamente cooperativa,
visto que não foi possível detectar intermediários estáveis em equilíbrio em solução. Em resumo, estes resultados podem revelar a termodinâmica e a base estrutural das diferentes
funções da proteína capsídica do HCV, que é um alvo promissor contra a replicação viral. |
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